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柯蕊:AMPK信号通路抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的分子机制研究 PPT讲座视频 中华医学会第八届全国肺栓塞与肺血管疾病学术会议暨第六届国际肺循环研讨会
标题: AMPK信号通路抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的分子机制研究
讲者: 柯蕊
单位: 西安交通大学医学院第一附属医院
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论文摘要: 目的 肺血管重塑是肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension, PAH)的主要发病机制,而肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells, PASMCs)在肺血管重塑过程中起着关键作用,因此,探讨PASMCs增殖的分子机制并进行相关干预研究是治疗PAH的关键策略。本研究旨在明确腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase, AMPK)是否可以抑制PASMCs的增殖及其分子机制,为治疗肺动脉高压寻求新靶点。
材料与方法  组织块贴壁法培养原代大鼠PASMCs, 应用α-SM-actin免疫荧光法鉴定细胞纯度;用AMPK α1和AMPK α2的siRNA转染PASMCs,采用BrdU掺入法检测细胞增殖,Western blot检测p-/t-mTOR、Skp2和p27水平;进一步在转染AMPK siRNA之前,预先用mTOR siRNA或Skp2 siRNA转染PASMCs,检测细胞增殖及Skp2和p27水平。
结果  在培养的原代PASMCs中,特异性沉默AMPK α2可明显促进PASMCs的增殖(P<0.05,与对照组比较),而特异性沉默AMPK α1对PASMCs的增殖无明显影响;特异性沉默AMPK α2可明显增加mTOR磷酸化水平,上调Skp2、下调p27蛋白水平(P<0.01,与对照组比较);预先特异性沉默mTOR可逆转沉默AMPK α2引起的Skp2水平的升高、p27水平的降低以及PASMCs的增殖(P<0.05,与AMPK α2沉默组比较);预先特异性沉默Skp2亦可逆转沉默AMPK α2引起的p27的下调以及PASMCs的增殖(P<0.05,与AMPK α2沉默组比较)。
结论  AMPK可通过抑制mTOR的活性,下调UPS中E3连接酶Skp2的表达,继而上调细胞周期抑制蛋白p27的表达,抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖。以上研究结果提示,激活AMPK具有潜在治疗PAH的作用,为研发新的靶向治疗药物提供了思路。

呼吸内科

西安交通大学第二附属医院

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l Right heart failure in pulmonary arterial hypertension: mecha-nisms and treatment

作者: Herman Jan Bogaard

单位: Dept of Pulmonary Medicine, VU University Medical Center, , Amsterdam, the Netherlands

来源: 中华医学会第八届全国肺栓塞与肺血管疾病学术会议暨第六届国际肺循环研讨会

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