投稿注册咨询:400-008-5413 销售咨询:010-6029 9110、80259978
凌婧:抗ADAMTS13单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 PPT讲座视频 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会
标题: 抗ADAMTS13单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
讲者: 凌婧
单位: 苏州大学附属儿童医院
播放: 2205
论文摘要: 目的 建立分泌抗ADAMTS13单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备针对ADAMTS13不同结构域的单克隆抗体,为研究ADAMTS13功能、血栓形成的机制以及研究TTP治疗的新方法的提供有力的研究工具。
方法 首先,我们构建了稳定表达截短型ADAMTS13-T7蛋白的HeLa细胞株,并扩大培养,收集无血清培养上清。通过Ni-NTA Agarose将浓缩后上清纯化,然后通过SDS-PAGE电泳后进行考马斯亮蓝染色和western blot鉴定,以全长ADAMTS13为对照。然后,我们用真核表达的截短型ADAMTS13-T7蛋白采用皮下多点注射免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并用纯蛋白液直接经尾静脉注射加强免疫。末次免疫后第3天眼球采血,分离上述小鼠抗血清,用ELISA方法测定免疫小鼠与ADAMTS13-T7蛋白的抗血清效价。用未免疫的正常小鼠血清作为阴性对照。用重组ADAMTS13-T7蛋白包板,ELISA检测免疫后balb/c雌性小鼠抗血清效价。取小鼠脾脏,制成单细胞悬液与SP2/0骨髓瘤细胞以10:1的比例混合,进行细胞的融合。将融合杂交瘤细胞稀释至96孔板后置于37℃、5%CO2培养箱中培养。两周后观察96孔板中是否有克隆,选生长良好的克隆孔检测,阳性克隆孔扩大培养并再次检测。
结果 构建了稳定表达截短型血管性血友病因子裂解蛋白酶ADAMTS13-T7的HeLa细胞株,收集上清纯化后获得重组ADAMTS13-T7。利用真核表达的截短型ADAMTS13-T7蛋白免疫balb/c雌性小鼠,ELISA检测免疫后抗血清效价约为1:20000。利用杂交瘤技术通过融合,获得多株分泌抗重组ADAMTS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株。将其中的30株转入液氮中冻存,以备进一步分选及功能研究。
结论 使用真核表达的截短型ADAMTS13-T7蛋白,作为免疫抗原免疫balb/c雌性小鼠,并通过杂交瘤技术,融合获得多株分泌抗重组ADAMTS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株,为进一步筛选出具有一定功能活性的单克隆抗体,从而为ADAMTS13结构及功能的研究提供更多的有力工具奠定良好基础。

血液内科

苏州大学附属儿童医院

该讲者其他视频
相关视频
该讲者其他论文
相关论文

l 病例讨论

作者: 刘瑞清

单位: 西安市儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l RDS预防的思考

作者: 封志纯

单位: 陆军总医院附属八一儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l 益生元在儿科中的应用

作者: 俞惠民

单位: 浙江大学医学院附属儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l 病例讨论

作者: 于莹

单位: 湖南省儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l 病例讨论

作者: 黄河玉

单位: 华中科技大学同济医学院附属同济医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l 病例讨论

作者: 聂秀真

单位: 山东大学齐鲁儿童医院/济南市儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l 病例讨论

作者: 林先耀

单位: 杭州市儿童医院

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

l Noisy breathing in infants-diagnostic approach

作者: Michael S. Schechter MD, MPH

单位: Division of Pulmonary Medicine Department of Pediatrics Virginia Commonwealth University

来源: 中华医学会第二十一次全国儿科学术大会

学术交流区 (0条留言)
最新留言
产品&服务
• 学会/协会管理系统
• 会务通学术会议服务平台
• 现场注册签到管理系统
• 会场幻灯传输转播系统
• 学术会议网络直播系统
• E-Poster电子壁报系统
• 企业数字助展服务
• 花生会议管理系统
帮助中心
• 功能更新
• 常见问题
关于我们
• 公司简介
• 版权声明
• 联系我们
微信扫描
美迪康官方微信
Copyright©2007-2017 MEDCON. All Rights Reserved.北京美迪康信息咨询有限公司 版权所有. 京ICP备11011505号-31 京公网安备 11011502002826号