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标题： miR-181a 调控CD4+ T 细胞活化及其在类风湿关节炎发病中的作用

讲者：刘欣

单位：第二军医大学附属长征医院

关键词：

类风湿关节炎 T细胞活化 miR-181a DUSP6

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论文摘要： 目的：类风湿关节炎是一个多系统的自身免疫性疾病，免疫调节紊乱是RA主要的发病机制,而异常的naïve T细胞可介导MHCII类分子限制的细胞毒作用并产生大量的炎性细胞因子，从而导致疾病的发生发展。miRNAs是一类不具有编码功能的小分子RNA,但广泛参与基因的转录后调控，在类风湿关节炎发病中扮演重要角色。miR-181a是一类调节T细胞敏感性的关键分子, 同时参与调控炎症反应。因此本实验着重于研究类风湿关节炎患者外周血CD4^＋ T细胞及其亚群的功能和miR-181a是如何调控T细胞功能在类风湿性关节炎患者中的作用机制。
材料与方法：采用1987年美国RA分类诊断标准，纳入2016年1月至2017年1月长征医院类风湿关节炎病人45例，健康对照组38例。采用流式细胞仪检测外周血CD4^＋ T细胞及其亚群的钙内流强弱，蛋白磷酸化水平（pERK，pZAP-70，pLCK），表面活化标志物（CD25和CD69）和胞内因子（IL-1,IL-2,IL-6,IL-10,IL-17,TNF-a,IFN-γ）的表达。依据qRT-PCR检测naïve CD4^＋T细胞miR-181a及其下游mRNA（DUSP-6 ,PTPN22）表达，用Western Blot检测DUSP-6 和PTPN22蛋白表达，并通过荧光素酶报告实验验证miR-181a与DUSP6的负性关系。通过miR-181a mimic和抑制剂的转染实验，评价naïve CD4^＋T细胞功能的变化。
结果：与正常人相比，类风湿关节炎患者外周血CD4^＋ T细胞的钙离子内流水平明显升高，与疾病活动度紧密相关；同时CD4^＋T细胞的TCR信号通路处于过度活化状态，表面活化标志物CD25和CD69明显高表达，ERK、ZAP70、LCK磷酸化水平显著增高；外周血naïve CD4^＋T细胞具有很强的钙离子信号和ZAP70、ERK的磷酸化水平，而在记忆性CD4^＋T细胞中未出现显著的表达差异，因此接下来的研究着重在naïve CD4^＋T细胞。类风湿关节炎患者naïve CD4⁺T细胞中miR-181a表达增多，与疾病活动度呈正相关；DUSP6的基因和蛋白水平表达均降低，PTPN22表达无差异；通过荧光素酶报告实验验证了DUSP6为miR-181a的靶基因。同时通过细胞转染实验发现抑制miR-181a表达可使类风湿关节炎患者naïve CD4^＋ T细胞钙流水平降低，抑制IL1α, IL6 and TNF-α的分泌，以及促进naïve CD4⁺T细胞向Th2细胞分化。
结论：类风湿关节炎患者外周血naïve CD4^＋ T细胞具有很强的钙离子信号和ZAP70、ERK的磷酸化水平明显增高，而在记忆性CD4^＋ T细胞中未出现明显的表达差异，说明naïve CD4^＋T细胞扮演着更为重要的作用。miR-181a表达的上调是通过降低DUSP-6的表达，从而促进naïve CD4⁺T细胞过度活化，调控T细胞敏感性。同时抑制miR-181a的表达能抑制炎症因子的分泌和促进naïve CD4⁺ T细胞向Th2细胞分化，抑制自身免疫反应，进而控制类风湿关节炎的病情进展，这可能为寻求类风湿关节炎的治疗靶标提供新思路。