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标题：强直性脊柱炎患者血浆来源外泌体中微小RNA谱的变化及意义分析

讲者：黄郁凯

单位：广东省第二人民医院

关键词：

强直性脊柱炎外泌体 miRNA 意义

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论文摘要： 背景：强直性脊柱炎（AS）严重影响人类健康，其发病机制及标记物的探索是目前研究的热点。外泌体（exosome）是细胞相互调控的重要介质，它可以通过负载相关蛋白质和微小RNA（miRNA）等调控受体细胞，为探索疾病发病机制和标记物提供了新的思路。至于exosome负载的miRNA与AS的关系，目前尚无相关报道。目的：分析AS患者血浆来源exosome中miRNA谱的变化，并进一步探索目标差异miRNA与AS的关系。方法：选择于2016年7月至2017年2月于我科住院的AS患者为研究对象，匹配健康志愿者为对照组。用Ribo^TM试剂盒法从血浆中分离exosome，并通过透射电镜及western blot进行鉴定。随机抽取3名AS患者及3名健康志愿者血浆来源exosome的RNA进行小RNA（Small RNA，sRNA）测序，分析两组的miRNA谱变化，并以|log2(Fold change)|≥1和P＜0.05为条件，筛选出差异miRNA。进一步选取变化倍数大且表达量高的目标miRNA进行Q-PCR验证，通过ROC曲线探讨其对AS的诊断价值，并分析其与AS患者炎症活动指标的关系。结果：透射电镜结果显示获得的exosome直径分布于30-120nm，Western blot结果显示exosome呈CD63和CD9阳性。sRNA测序原始数据质量分析结果显示各个样本的碱基含量及碱基质量分布符合要求。将有效数据进行生物信息学分析，结果显示AS患者血浆来源exosome中的miRNA数目为（632.000±43.555）个，健康志愿者的为（509.667±77.501）个，差异具有统计学意义（P＜0.05）。以|log2（变化倍数）|≥1和P＜0.05为筛选条件，发现上调的有miR-21-5p等80个miRNA，下调的有miR-27a-5p等19个miRNA。选取变化倍数大且表达量高的miRNA-21-5p进行Q-PCR验证及意义分析。Q-PCR结果显示AS患者中miRNA-21-5p的表达水平为对照组的（2.940±1.572）倍，差异具有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示AUC值为0.809 (CI95%: 0.691-0.921)，差异具有统计学意义（P＜0.05）。ROC曲线的cut off值为1.310，对应的特异性为80.0%，敏感性为76.32%。根据cut off值将38名 AS患者分为 miRNA21-5P 高表达组（≥1.310）和miRNA21-5P 低表达组（＜1.310），并进一步分析两组患者CRP及ESR水平的差异，结果显示12名患者属于 miRNA21-5P 低表达组，26名患者属于miRNA21-5P 高表达组，并且miRNA21-5P 高表达组的CRP及ESR水平明显高于miRNA21-5P 低表达组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：Exosome中miRNA谱的变化与AS患者的关系密切，其中miRNA21-5P对AS具有较高的诊断价值，并与AS患者的CRP及ESR水平密切相关，是AS的潜在标记物。