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标题：烧伤重症监护病房住院患者创面泛耐药鲍氏不动杆菌的噬菌体的按需建库及特征分析

讲者：杨子晨

单位：第三军医大学第一附属医院/重庆市西南医院

关键词：

噬菌体鲍氏不动杆菌泛耐药 MLST分型

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论文摘要：目的为了分析烧伤ICU患者创面泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体建库的可行性及其特征。方法 2014年1月—2016年1月，重庆市第三军医大学西南医院烧伤研究所ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年1月—2016年1月，广东省6所医院烧伤ICU住院患者创面分离出35株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集这166个菌株进行如下实验。（1）对菌株进行多位点序列分型（MLST），分析重庆市、广东省来源菌株的分型。（2）采用污水共培养法选用菌株所在医院的污水分离噬菌体，记录来源于重庆市、广东省的菌株应用两地来源污水分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。（3）2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株分别为序列型75、序列型977，选用其噬菌体与各菌株进行交叉感染，观察噬菌体与菌株同型或不同型时的裂解情况并计算裂解率。（4）任取1株噬菌体等分为3份，通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度值。然后于-20 ℃冰箱、室温、4 ℃冰箱条件下采用LB液体培养基保存噬菌体1个月、2个月，检测该2个时相点噬菌体的滴度值，评价不同储存条件下噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、检验、单因素方差分析。结果（1）MLST结果显示，2014年1月—2015年1月重庆市来源的69株菌以序列型368（45%，31/69）为主，2015年1月—2016年1月重庆来源的62株菌以序列型75（26%，16/62）、序列型195（24%，15/62）为主。2015年1月—2016年1月广东省来源的35株菌以序列型977（46%，16/35）为主。（2）重庆市来源的菌株使用本地来源的污水分离噬菌体的效果（成功分离8次、失败分离1次、分离9个噬菌体）明显优于使用广东省来源的污水（成功分离1次，失败分离7次、分离1个噬菌体），广东省来源的菌株使用本地来源的污水分离噬菌体的效果（分离8次均成功）明显优于使用重庆市来源的污水（分离7次均失败），组间差异明显（P<0.05或P<0.01）。两地区来源菌株使用各自来源地区的污水分离噬菌体的效果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。（3）从序列型75、序列型977菌株分离的噬菌体对同型菌株的裂解率分别为81.25%、88.89%，均明显高于它们对不同型菌株的裂解率（分别为9.40%、5.67%，值分别为49.13、68.46，P值均小于0.001）。（4）与保存前比较，-20 ℃冰箱保存1、2个月噬菌体滴度值下降较多，室温和4 ℃冰箱保存1、2个月噬菌体滴度值下降较少。3种储存条件保存1个月、2个月噬菌体的滴度值相近（F值分别为1.29、1.07，P值均大于0.05）。结论两地来源的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST分型存在明显的时间和空间分布特征，并且使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好，噬菌体的裂解能力与菌株MLST分型密切有关，因此需要按照地域需要各自筛选噬菌体建立噬菌体库十分必要；噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。这些结果将为国内各地区泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库的建立提供必要性和可行性依据。