标题:
在不同降温速率下人卵子和胚胎细胞内外冰晶形成规律
讲者:
苑凤
单位:
大连市妇女儿童医疗中心生殖与遗传医学中心
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论文摘要:
目的:解析人卵子和胚胎基础低温生物学特性,研究在不同降温速率下人的卵子和胚胎细胞内外冰晶形成的规律。
方法:临床废弃不成熟卵子经过IVM培养形成MI或者MII卵子以及废弃培养形态较好的胚胎。然后转移进PBS包含1M的乙二醇和植冰剂Snomax(10 mg/L)溶液中,经过15分钟预处理后,放入BCS 196低温显微镜Linkam的冷热台。通过软件设定相应的降温程序从4-20oC/min的速率降温至-70℃,实时记录细胞内外冰晶形成的过程。卵子或者胚胎内部变黑,意味着细胞内冰晶的形成。
结果:细胞外冰晶平均结冰温度为7.38±0.34℃。细胞内冰晶分为两种,分别叫做高温冰晶(High Temperature Flashers)和低温冰晶(Low Temperature Flashers)。高温冰晶的形成的可能原因存在细胞膜损坏或在细胞外冰形成的过程中造成细胞损伤。当降温速率为4℃/分时,卵子和胚胎的细胞内冰晶平均温度分别为-24.5±8.42℃和-16.12±4.14℃;当降温速率为8℃/分时,卵子和胚胎的细胞内冰晶平均温度分别为-21.63±6.46℃和-12.38±4.74℃;当降温速率为20℃/分时,卵子和胚胎的细胞内冰晶平均温度分别为24.94±8.50℃和17.6±6.35℃。卵子平均细胞内冰晶温度(-23.7℃)更低于胚胎(-17.7℃)。
结论:根据不同降温速率下人卵子和胚胎细胞内冰晶形成的规律,有助于解析细胞内部水分在降温过程中的渗透动力学参数,结合细胞内水的渗透系数更好的理解人卵子和胚胎的低温生物学特性。