论文摘要:
目的:脑源性神经营养因子(BDNF)和卵泡刺激素受体(FSHR)都表达于卵巢颗粒细胞,并且二者在卵巢发育和功能调节中发挥重要作用。BDNF属于神经营养因子家族,在卵巢中行使调节卵泡生长、卵母细胞成熟、加速第一极体排出以及维持黄体等功能。FSHR作为一种促性腺激素受体,在卵巢成熟过程中调节卵巢类固醇激素合成以及卵泡生长。FSHR诱导的信号参与颗粒细胞核事件的调控。研究显示,BDNF相关的信号途径与FSHR mRNA表达相关且在调节卵泡发育中发挥调节作用,表明BDNF可能通过FSHR而影响颗粒细胞功能。本研究旨在探索BDNF如何通过调节FSHR的表达和修饰以及FSHR介导的信号途径而影响人颗粒样细胞系(KGN细胞)的类固醇激素合成及增殖。
方法:分别用PBS,FSH, BDNF 以及FSH + BDNF处理KGN细胞24小时。处理后,收集细胞培养上清及细胞裂解液用于后续检测。(1)用化学发光免疫系统检测培养上清中的雌激素和孕酮含量;(2)用EdU分析检测细胞的增殖状态;(3)用ELISA分析检测BDNF和cAMP的水平以及蛋白激酶A(PKA)的活性;(4)用免疫印迹法检测FSHR、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)以及磷酸化CREB的表达水平;(5)用免疫荧光和免疫沉淀法检测FSHR的磷酸化及泛素化修饰。
结果:(1)KGN细胞能够产生并分泌BDNF;(2)FSH+BDNF联合处理显著增加颗粒细胞雌二醇和孕酮的分泌并促进细胞增殖;(3)联合处理改变FSHR的表达、磷酸化和泛素化修饰;(4)联合处理增加了cAMP/PKA/CREB信号途径的活性。
结论:上述结果表明BDNF调节颗粒细胞的激素合成功能及增殖,这些
作用可能是通过FSHR偶联的cAMP/PKA/CREB信号途径介导的。本研究建立了BDNF和FSHR功能调节之间的联系,部分揭示了神经营养因子调节颗粒细胞激素分泌功能的相关机制。