标题:
Nrf2通过p53-p21通路影响减数分裂及早期卵子发生
讲者:
裘旭华
单位:
南京总医院
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论文摘要:
目的:原始生殖细胞减数分裂的正常启动与卵泡形成及发育密切相关,直接影响卵巢储备。NF-E2相关因子2(Nrf2)是抗氧化应激的关键转录因子,它在雌性生殖方面的研究较少。本研究旨在通过研究Nrf2对减数分裂启动过程中的作用及相关机制,以期为增加卵巢储备提供新思路。
方法:CD-1小鼠合笼见栓日为E0.5。收集E11.5-14.5的雌性胎鼠,分别通过Q-PCR及Western blot检测Nrf2的mRNA及蛋白水平。分离E12.5雌性胎鼠生殖嵴,分别用不同浓度的Nrf2抑制剂Brusatol、p53抑制剂pifithrin-α处理48 h后,一部分提取RNA,并进行Q-PCR,检测减数分裂启动、细胞周期以及凋亡相关的基因水平。另一部分继续培养10 d后行石蜡切片和HE染色,对各级卵泡及不同直径的卵母细胞数量进行分类、计数。
结果:Brusatol在生殖嵴中也是Nrf2的有效抑制剂,能抑制Nrf2蛋白水平及下游通路分子的mRNA水平;Nrf2的蛋白及mRNA 均动态表达于11.5-14.5 dpc 的雌性生殖嵴中,在12.5 dpc 时表达水平最高,提示Nrf2可能参与减数分裂启动;Brusatol剂量依赖地抑制减数分裂启动关键基因(Stra8、Sycp3、Dmc1、Dazl、Rec8)的mRNA水平、原始卵泡的组装,并减少各直径的卵母细胞数,证明Nrf2影响了减数分裂启动及早期卵子发生;进一步研究表明,Brusatol可调控细胞周期G1期相关因子的mRNA水平:抑制Cyclin E、CDK2,上调p53、p21,并增加凋亡相关分子的mRNA水平。在Brusatol处理的同时加入pifithrin-α抑制p53表达,则可恢复Brusatol引起的相关表型。
结论:Nrf2可通过p53-p21通路引起G1期阻滞、促进凋亡、阻止卵泡发育、卵母细胞的生长等多种机制影响减数分裂的启动及早期卵子发生。