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孔祥斌:小鼠精原细胞GC-1spg中miRNA-761与Nanos2的互作研究 PPT讲座视频 中华医学会第十二次全国生殖医学学术会议
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标题： 小鼠精原细胞GC-1spg中miRNA-761与Nanos2的互作研究
讲者： 孔祥斌
单位： 温州医科大学附属第一医院
关键词：
精原细胞 microRNA 生精调控
播放： 1139
论文摘要：

研究目的：研究microRNA (miRNA)与调控生精的重要基因的相互作用，初步分析小片段非编码RNA在生精调控中的可能作用机制。材料与方法：1、生物信息学预测分析：通过miRDB、targetscan数据库预测生精干细胞（spermatogenic stem cell，SSC）重要基因互作的miRNA，取交集。2、细胞水平的功能研究：在小鼠精原细胞GC-1spg中过表达候选miRNA，通过qPCR观察其对靶基因的表达量影响。在GC-1细胞中分别共转染候选miRNA和靶基因，通过双荧光素酶实验分析候选miRNA与靶基因之间是否存在互作。3、细胞活性和细胞凋亡观察：在小鼠精原细胞GC-1 spg中过表达候选miRNA，使用CCK8试剂盒检测细胞活性，Annexin V-FITC/PI双染色法-流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：通过生物信息学预测分析初步筛选出生精基因GFRA1、NANOS2及可能参与互作的miRNA-761、miRNA-214-3p。通过细胞水平预实验筛选出NANOS2和miRNA-761作为研究对象。在GC-1中过表达miRNA-761可显著抑制Nanos2表达量（p＜0.05）。利用质粒在GC-1细胞中共转染miRNA-761与Nanos2的3’端非翻译区（Nanos2-3’UTR），通过双荧光素酶实验分析证实miRNA-761与Nanos2之间存在互作。在GC-1中过表达miRNA-761后细胞活性显著下降，出现细胞生长抑制现象，细胞凋亡增加（p＜0.05）。结论：通过本研究发现小鼠精原细胞GC-1中miRNA-761可以与NANOS2表达产物的3’UTR结合，从而抑制生精基因NANOS2的表达。GC-1中过表达miRNA-761可以降低精原细胞增殖活性，促进细胞的凋亡。这提示miRNA-761至少可以通过竞争性内源RNA（competitive endogenous RNA，ceRNA）机制在生精调控中发挥作用。至于miRNA-761通过该机制在生精调控中发挥作用的完整环节，则需要进一步的研究予以阐明。

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孔祥斌

生殖医学科

温州医科大学附属第一医院

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